HPLC色谱纯溶剂与检测器的匹配
在使用紫外可见光检测器时,需选用无紫外吸收特性的溶剂作流动相。样品测定波长应当在溶剂紫外吸收波长上限以上,噪声降至10-4~10-U,才能保证检测的灵敏度,才能用于梯度洗脱。流动相溶剂在整个梯度范围内互溶性要好,尽量减少溶剂折光指数对溶剂组成梯度的影响。
HPLC色谱纯溶剂折光指数的改变会导致紫外吸收度的变化,使紫外检测器产生噪音和漂移。因此,当使用两种或两种以上溶剂做梯度时,其折光指数应该尽量接近,尽量减少溶剂紫外吸收度改变的影响。
在使用示差折光检测器时,应使流动相的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的差别,因为二者的折射率差别越大,检测器的响应信号越大,检测灵敏度越高。示差折光检测器一般不用于梯度洗脱,这是因为随溶剂组成的改变,流动相的折光指数也在改变,无法使基线稳定。
使用荧光检测器时,不能使用可熄灭、抑制或吸收荧光的溶剂作流动相。溶剂的极性和溶液的温度对荧光强度有明显的影响。增大溶剂的极性,导致荧光增强。通常荧光物质溶液的荧光效率和荧光强随着温度的升高而降低。此外,当样品浓度较高时,易引起荧光猝灭效应和内滤效应,溶液浓度越大,该效应越显著,溶液中的其它成分,特别是顺磁性物质的存在,将使猝灭效应加剧。因此,在进行荧光检测时,试样要配成低于10-6g/mL浓度的溶液,要使用不含荧光物质的溶剂。
HPLC色谱纯溶剂储存注意事项:
储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不超过30℃,相对湿度不超过85%。保持容器密封。应与氧化剂、碱类、活性金属粉末分开存放,切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。