利巴韦林和金刚烷胺均属于抗病du药物,在人类流感类疾病防治领域应用广泛。我国农业部560号公告明确规定抗病du药物为禁用兽药,但市场上非法添加的现象仍然存在,而一次性高效检测这2种物质却是一大难点。
安谱实验精心研究推出金刚烷胺/利巴韦林柱,可以同时分析检测利巴韦林和金刚烷胺两种目标物。通过一次实验,分步洗脱的方式,分别收集得到两种目标物。实验验证回收率和稳定性优异,而且流速适中,大大节省前处理时间,提高效率,降低检测成本。
1前处理
前处理方法
称取鸡肉、鸡蛋基质样品2g,置15mL离心管中,加入内标混合溶液,再加入 5mL 0.25mol/L 乙酸铵溶液(pH=4.8) 和 40μL 100pm 酸性磷酸酶溶液,涡旋 30s,37° C 恒温避光酶解 2h。在酶解液中加入 4mL 2% 三氯yi酸(pH=4.8)溶液,涡旋 30s,10000 r/min,离心 10min,移取上清液于另一离心管中,用 50% 氨水调 pH 至 8.5±0.1,加水定容至 10mL,再次离心,得到上层澄清提取液。取 5mL 提取液待上样
活化平衡
5mL 乙腈、3mL 0.5% 甲酸水、3mL 0.25M 乙酸铵 (pH=8.5)
上样
5mL 待上样液
淋洗1
3mL 0.25M 乙酸铵 (pH=8.5)、3mL 水,抽干
洗脱1
2mL 0.5% 甲酸水,收集洗脱液,漩涡混匀后过滤膜,待 LC/MC/MC 检测(利巴韦林)
淋洗2
3mL 甲醇,抽干
洗脱2
5mL 5% 氨化甲醇(含 10% 异丙醇),收集洗脱液(金刚烷胺)
浓缩
45 ° C水浴中氮吹近干,加 1mL 0.5% 甲酸水(含 10% 甲醇)定容,混合后,过滤膜,待 LC/MC/MC 检测
2色谱条件
仪器:ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪,串联 AB 5500 型三重四极杆质谱仪,配电喷雾离子源 (ESI)
洗脱程序:
目标物离子对:
3实验谱图
图1 利巴韦林标准曲线
图2 金刚烷胺标准曲线
图3 标准品中利巴韦林峰(245.1/113.1)
图4 标准品中 13C5-利巴韦林峰(250.1/113.1)
图5 鸡肉基质加标过 SBEQ-CA6535 利巴韦林峰
图6 鸡蛋基质加标过 SBEQ-CA6535 利巴韦林峰
图7 标准品中金刚烷胺峰(152.2/135)
图8 标准品中 D15- 金刚烷胺峰(167.2/150.1)
图9 鸡肉基质加标过 SBEQ-CA6535 金刚烷胺峰
图10 鸡蛋基质加标过 SBEQ-CA6535 金刚烷胺峰
4实验结果
利巴韦林加标回收率
金刚烷胺加标回收率
结果讨论: 安谱实验开发的柱基质适用性良好,实验回收率在 78%~112%,RSD 小于 10%,产品性能与进口品牌相当,且流速更快大大节省时间。
5推荐耗材