干货丨标准曲线经典十问十答，助您搞定标准曲线！

     近实验很糟心，标准曲线弄不清。一条要拉几个点、浓度范围怎么选。线性需要几个九、期间核查有没有……

     的确，大家在标准曲线的制作过程中会有很多的问题，今天小编就带大家全面的了解标准曲线的制作规则。一起来看看吧！

01

Q:什么是校准曲线？

A:标准曲线就是我们平常大家操作得多的，把标准品稀释成不同的浓度点，直接上机测试，绘制曲线用于定量。但是如果样品经过复杂的前处理，比如消解，萃取或者净化等过程，那么目标化合物就会有一定的损耗，用标准曲线来定量是不准确的，我们就可以用工作曲线。工作曲线就是所使用的标准物质溶液经过与样品相同的前处理，这样就可以尽量减少前处理带来的计算误差了。

02

Q:标准曲线要做几个点？

A:标准曲线需要几个数据点，与所检测组分的浓度范围、检测信号响应类型、仪器的灵敏度和分辨率都有关。

对于一些低浓度，特别是痕量分析，比如二噁英、多氯联苯等等，有些样品的含量在ppb级别，且浓度范围不是很大，检测器响应可靠，背景干扰非常小的，可以选用较少的工作点，有的选三个浓度点就可以了，有的甚至可以只用一个浓度点，另一个点直接用坐标原点。

但是对于一些样品浓度范围较宽的，比如顶空法测一些样品中的苯系物的项目，样品的浓度范围变化很大，所以标曲的浓度范围设置很宽，但是检测器的响应与浓度的关系不是一条直线，也就是说不是一次方程，这时可以采用分段校准的方式。有的项目比如说GPC测分子量分布的，由于受到色谱柱工艺等条件的限制，很难做到线性，经常用三次方程拟合，如果拟合的曲线达不到三个九也会做五次方程的拟合。这几种情况下就需要根据需要多做几个数据点。

当然在各项拟合指标合格的情况下，采用一次方程更符合统计学上参数少的统计简洁性原则。

补充：如果是分段校正，则每段需要至少两个数据点。而对于一些样品无浓度范围规律的，特别是一些检测机构，如果分析仪的检测响应可靠，环境因素影响少的，可以做校正曲线。若是环境因素影响大的，则不必做校正曲线，而采用标准加入法反而简便一些，比如阳极溶出伏安法测样品浓度。

03

Q:标准曲线为什么常见的是奇数个点？

A:其实标准曲线做几个点，点分布如何，影响的是测试结果的不确定度。

好的测量应该是不确定度小的，这在判断样品的结果是否超标或是否符合限值的时候至关重要。

我们在推算样品的不确定度时，有两个结论：一、标曲的重心点处，所查出来的样品不确定度小。二、标曲的点数越多，样品的不确定度越小。所以在样品浓度的附近应尽量多的分布标准点。奇数点的设置就是先通过已知信息来确定浓度范围，在该浓度范围内先确定中间点，然后在中间点左右分布对称的标准点，所以做出来的标曲常常是奇数个点。

04

Q:标准曲线浓度点如何设置？

A:对于我们分析实验室的一些常规理化性质的测试，一般标准曲线的第yi个点是检出限的5~10倍。以后根据一倍递增，gao浓度是低浓度的10~20倍为宜。对于浓度范围宽的曲线，递增的倍数会更大，比如三倍，五倍等。这个也是要根据仪器的灵敏度来调整的。

05

Q:一元标准曲线方程各参数是什么意思？

A:一元标准曲线方程y=a+bx，r² 。 其中x表示化合物浓度，y表示化合物在仪器上的响应，a表示在y轴上的截距，b表示曲线的斜率，1/b 表示化合物的响应因子。响应因子可以简单快速的判断化合物配制的准确性和仪器的稳定性，比如氘灯的能量是否正常。r表示x与y的相关系数：r越接近于1，正向相关性越好，r越接近于-1，负向相关性越好，r越接近于0，相关性越差。r² 表示判定系数，是一个统计学概念，当根据试验数据进行曲线拟合时，试验数据与拟合函数之间的吻合程度，用一个与相关系数有关的一个量r²来评价：r²值越接近1，吻合程度越高，越接近0，则吻合程度越低。

06

Q:标准曲线r²值需要几个9才合格？

A:实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系数不应低于0.99。

其实，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性大于0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近gao浓度一半（中间浓度）的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。

如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。例如，样品的浓度约20ppb，但在0~50ppb范围建立标准曲线，但线性非常不理想，这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间，作五个标准。

07

Q:相关系数的有效数字？

A:GB5750.3-2006 8.2.7项有如下规定：校准曲线相关系数只舍不入，保留到小数点后出现非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小数点后都是9时，多保留小数点后4位。

08

Q:标准曲线有效期有什么规定？

A:我们做好了一次曲线，我们还要保证以后每一次曲线，每一次定量都是准确的，这样就要做标准物质的期间核查。

（1）标准曲线属于实验室质量控制的范围，按照《实验室资质认定评审准则》中结果控制的要求：定期使用有证标准物质（参考物质）进行监控和/或使用次级标准物质（参考物质）开展内部质量控制。

（2）准则中并未对“定期”进行规定，所以如果“定期”，就根据实验室的实际情况来定了。

（3）既然准则上没说明，那根据一般的分析教材，当实验条件（包括药剂、人员、仪器等）发生变化时，hao重新制作标准曲线。

09

Q:标准曲线能不能长期使用？

A:这就涉及到仪器的期间核查，要用标准曲线的质控点进行核查。每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准液，其测定浓度与校准曲线标准点的浓度相对误差不得超过规定范围，如果超过规定相对误差，需重新绘制校准曲线。

也可以这样说，不同的分析项目，不同的分析方法，校准曲线斜率的稳定性不同。如校准曲线的斜率较为稳定，则在样品分析时，可只测定两个标准点，当此两个标准点与原曲线相应点的相对偏差均小于5%时，可使用原校准曲线。因此，样品分析前，需根据斜率的稳定性来确定是否需同时制作校准曲线。

我们一般的做法是，根据检测的频率来做，如果该项目天天都要检测，并且检测量较多时，要求至少每周做一次曲线。如果检测量上，一个月都没有几单的话，就一个月做一次曲线。当然，仪器如果出现故障并大修后回来的，经过检定后，需要重新做曲线。

10

Q:标准曲线是否必须过原点？

A:标准曲线不一定非要过原点，只要线性好就可以了。因为做空白的话基本上不会过原点。过原点是强制过的，实际曲线可能不过，就会造成误差。不过原点是因为有系统误差。

针对是否过原点(0，0)问题，可以从原点(0，0)代表的意义来考虑：

即所测组分浓度为零的时候，信号响应值（液相色谱也就是峰高或者峰面积）是否也为零。通常来说色谱分析是属于这种情况的，因而可以把（0，0）点作为一个浓度水平计入标准曲线（甚至不需要真的去配一个浓度为零的标准溶液来进样），这也是单点法定量的一个依据；而类似的情况在光谱法测定时就讲不通了，浓度为零的标准溶液（本底）响应信号（吸光度）往往不是零，这个时候标准曲线就不一定过原点了。

总结

了解各个分析项目校准曲线斜率的稳定性及影响稳定性的主要因素，可决定是否能采用质控点检验原校准曲线，省略重新制作校准曲线；从校准曲线斜率的变化，可判断标准溶液的稳定性，从而确定其标定周期；分析低浓度样品时，应使用高纯度的水和试剂，以减少空白值，降低样品的分析误差。

科学地运用校准曲线，对于降低分析成本、提高检测质量有着重要的意义。