中药材的种类多成分复杂,而农药残留分析属于痕量分析,极易被中药成分所干扰。因此2020版中国药典第五法中, 提供了直接提取法,快速处理法和3种固相萃取法对基质样品进行净化, 并要求做空白基质加标曲线、 来减轻基质效应对检测结果的影响。
安谱实验做了大量实验摸索, 在中药禁用农药检测上积累了丰富的经验, 在此以一味药材--金银花中的农药残留检测为例, 讲解下具体工作中如何进行条件选取:
推荐的净化方法和标准品搭配
实验数据
一、基质:金银花
二、基质样品的前处理
1.快速样品处理法(QuEChERS)法
产品特色:
★ 超洁净填料,严控本底
★ 多管漩涡混合器,一次性可以处理50个样品,可以提高数据的平行性
2.固相萃取净化方式一:分散性固相萃取法(dSPE)
产品特色:
★ 超洁净填料,严控本底
3.固相萃取净化方式二:HLB SPE固相萃取法
产品特色:
★ 填料自产,严格质控,易把控;
★ 极性、非极性化合物都有较高回收率;
★ 极duan耐酸碱下也有很好的回收率;
★ 特别适用于复杂基质,流速快,过柱时间短。
4.固相萃取净化方式三:石墨化碳氨基复合固相萃取法
产品特色:
★ 填料自产,严格质控,易把控;
★ 农药多残留检测jia选择。
三、分析条件
1.气相色谱-串联质谱法
色谱柱:GAEQ-501222 CD-50气相毛细管色谱柱 30m*0.25mm*0.25um
进样口温度:250℃
分流模式:不分流进样
控制模式:恒压,柱前压力为146kPa
升温程序:初始温度60℃,保持1分钟,以每分钟10℃的速率升温至160℃,再以每分钟2℃ 的速率升温至230℃,后以每分钟15℃的速率升温至300℃,保持6分钟。
检测器:三重四极杆串联质谱仪
离子源:电子轰击源(EI)
离子源温度:250℃
传输接口温度:250℃
质谱监测模式:多反应监测(MRM)
2.高效液相色谱-串联质谱法
色谱柱:LAEQ-2110I1 CNWShell C18 液相核壳色谱柱 2.1 × 100mm,2.6um
流动相:A相 0.1%甲酸溶液(含5mmol/L甲酸铵)
B相 乙腈- 0.1% 甲酸溶液(含5mmol/L甲酸铵)(95:5)
流速:0.3mL/min
柱温:40℃
离子化模式:ESI,正离子模式分析
监测模式:多反应监测(MRM)
四、实验结果
1.金银花基质基质样品方法筛查谱图信息
2.金银花样品方法筛选实验回收率数据
经验分享
1.根据GC-MS/MS和LC-MS/MS的谱图分析,不同前处理方法的净化效果各有不同,总体来看,固相萃取法的净化效果要相对好于快速QuEChERS方法。不同基质的净化情况可能不尽相同。
2.根据回收率数据分析,GC-MS/MS和LC-MS/MS两种仪器上,重复的目标物只要有一种仪器满足要求即可;金银花样品GC-MS/MS,方式一和方式二回收率基本满足要求,均在60%-120%之间;LC-MS/MS仪器,快速QuEChERS方法基本满足要求,回收率较差的杀chong脒和水胺硫磷可使用GC-MS/MS数据,HLB方法也基本满足药典要求。
3.对两种仪器回收率的数据以及操作的方便性进行综合考虑,金银花样品的you前处理方法是方式二(HLB小柱)净化。一种净化方法,一个样品,可同时满足GC-MS/MS和LC-MS/MS两种仪器的检测需求,且55种目标物均可满足60%-120%的要求。
4.不同的中药材基质效应并不相同,不同的基质可能选择不同的前处理方法,一种基质也可能需要选择两种不同的方法综合进行分析以满足55种物质的回收率。具体哪种基质净化方法更适合特定的药材,需要进行空白基质加标实验来摸索。推荐优先选择HLB方法和QuEChERS方法进行初步筛选。
安谱实验
2020版中国药典禁用农药检测方法包
01标准品
02超低本底的质谱级试剂
03基质净化产品
04色谱柱
05计量器具
06*仪器