安谱优选（二）——免疫亲和柱产品

样品前处理：

基质：奶粉

称取试样 2.5g( 精确到 0.01g) 置于 50mL 离心管中，加入 VB12 标准品混匀，将 20mL 已预热到 60℃的水加入到样品中使其溶解，溶解后冷却至室温，用水定容至 25mL，摇匀，4000 rpm 离心 15min，准确吸取下层液20mL 于干净容器中，备用。

小柱操作：

维生素 B12 免疫亲和柱，SBBB-CC55002，3mL/25pcs

上样：上述溶液以约 1-2 滴 /s 的流速缓慢通过亲和柱

淋洗：上样液下降至柱体时（未完_全流干），用 10mL 水淋洗，弃去全部流出液，并使 2-3mL 空气通过柱体

洗脱：1mL 甲醇，控制流速约为 1 滴 /s, 收集全部洗脱溶液于玻璃试管，加入 1mL 水混匀供 HPLC 分析。

样品前处理：

基质：液态奶、奶粉

称取 5 g 样品，用 pH 7.0 PBS 溶液定容至 50 mL，混匀，超声 10 min。

① 于 10000 r/min 离心 15 min，吸取 20 mL 中间层试液于另一 50 mL 离心管中，作为上样液。

② 或将提取样本用纤维滤纸（SCEQ-GF07110）过滤，准确吸取滤液 20 mL 于另一 50 mL 离心管 中，作为上样液。

小柱操作：

SBBB-CC55004，Protein G 免疫球蛋白亲和柱（HP 柱）,1 mL；

活化 ：10 mL pH 7.0 PBS 溶液活化亲和柱，调节压力使其流速约 2 mL/min（1 滴 /s）通过亲和柱，直至液面下降到亲和柱管体（未完_全流干）；

上样 ：将上述前处理后的 20mL 上样液，在重力或负压作用下，缓慢通过免疫亲和柱，流速大约 1滴 /2s，直至样品全部通过亲和柱；

淋洗 ：用10 mL pH 7.0 PBS 溶液洗涤亲和柱上多余的杂质，适当给一些压力，控制流速以 2-3 mL/min（1~2 滴 /s），直至样品全部通过亲和柱，并排干淋洗液；

洗脱 ：用 5 mL 洗脱液（pH 2.5 甘氨酸溶液）洗脱亲和柱，在重力作用下或负压作用下，缓慢通过免疫亲和柱，控制流速以 1 mL/min（1~2 滴 /2 秒），直至样品全部通过亲和柱，并排干洗脱液，收集全部 5 mL 洗脱液，注入 HPLC 检测。