安谱优选（十六）——免疫亲和柱产品

准确称取试样5.0 g于50 mL离心管中，加入1 g NaCl，准确加入20 mL乙腈-水（6+4，v/v）溶液，震荡30 min或高速匀质2 min。滤纸过滤，准确移取2.0 mL上清液加入18.0 mL 1% Tween-20 pH 7.0 PBS稀释，混匀，备用。

准确称取试样5.0 g于50 mL离心管中，加入1 g NaCl，准确加入20 mL甲醇-水（8+2，v/v）溶液，震荡30 min或高速匀质2 min。滤纸过滤，准确移取5.0 mL滤液并加入45.0 mL pH 7.0 PBS稀释，用玻璃纤维滤纸过滤（SCEQ-GF07110），至滤液澄清，量取20 mL滤液，备用。

将上步20 mL滤液以1-2滴/秒的流速全部通过亲和柱,直至空气进入亲和柱。将10 mL pH 7.0 PBS溶液以1-2滴/秒的流速通过亲和柱（切记洗脱前不要用水洗，否则影响柱子稳定性），直至空气进入亲和柱。将3 mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 )以1滴/秒的流速洗脱亲和柱，将洗脱液收集于玻璃试管中。50 ℃下氮气浓缩吹干后，用50%甲醇水定容至0.5 mL或1.0 mL，供HPLC或LC-MS分析。

准确称取试样25.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加入5.0 g氯化钠，准确加入100.0 mL,80%甲醇水，以均质器高速搅拌提取2min。滤纸过滤后准确移取5 mL滤液，然后用pH 7.0 PBS溶液定容至50 mL，用玻璃纤维滤纸过滤（SCEQ-GF07110），取滤液10 mL，备用。

准确称取试样40.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mL乙腈，以均质器高速搅拌提取2 min。滤纸过滤，准确移取20.0 mL滤液，50℃氮气吹干仪下氮吹，吹干后，加入1 mL甲醇溶解沉淀物，然后用pH 7.0 PBS溶液定容至20 mL，用玻璃纤维滤纸过滤，取滤液10 mL，备用。

将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃注射器下。准确移取10.0 mL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2 mL/min（1滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3 mL空气通过柱体。以2-3 mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0 mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3 mL空气通过柱体。准确加入1.0 mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2 mL/min（1滴/秒），收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。