薄层色谱TLC实验操作程序及其基本技术

薄层色谱TLC实验操作程序及其基本技术

1.薄层色谱TLC的制备：分软板和硬板两种。铺板，一般取一份吸附剂加两份水，研磨调成糊状，涂布，厚度一般为0.3-0.5nm，一块5×20cm板约需3g吸附剂。室温下晾干，于105－110℃活化0.5-1小时，置干燥器内备用，1周内可使用，超出1周，用前需再次活化，不主张反复活化，长期使用。  

2.供试品溶液的制备：按规定的方法制备。

3.对照品溶液及对照药材溶液的制备：按规定的方法制备。  

4.点样  

(1).直接点样法：点样量一般不超过10ul，点样时不要损伤薄层板表面，宜分次点加，直径不要超过4mm，点样基线距底边为1.0-1.5cm，距两边不少于1.0cm，两个样点距离可视斑点扩散以不影响检出为宜，一般为1.5-2.0cm，点样基线与薄层板地边平行。  

(2).滤纸移样法：薄层板上打孔，另取大小相同的滤纸，置针尖上，点样，将滤纸置挖好的小孔上，要求吻合良好。  

5.展开剂的制备：按比例配制，现配现用。  

6.层析缸的饱和：为使Rf值重现性良好，展开剂置于层析缸中，缸壁贴上两条高、宽适宜的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，室温放置1小时左右，俟展开剂挥发，使系统平衡。  

7.薄层板的预饱和：克服边缘效应以及改善分离效果，Rf值重现性良好。  

8.展开：水平展开和垂直展开，浸入深度距底边0.5－1.0cm，距原点5mm为宜，切勿将样点浸入展开剂中，展距以7－15cm为宜，展距过大，斑点扩散，度差，展距过小，分离效果差。  

9.显色

(1).蒸气显色法：常用挥发性的酸、碱如盐酸、硝酸、浓氨、二乙胺等蒸气显色。

(2).试剂显色法：常用喷雾法或浸渍法处理，显色试剂常用硫酸、碘的氯仿溶液、碱性高锰酸钾溶液、磷钼酸等。10.色谱的检视

(1).有色物质：日光下直接观察或在紫外灯下观察荧光斑点。

(2).无色物质：

1）在紫外灯下（波长）下观察化合物本身不同颜色的暗斑或荧光斑点，或显色后按有色物质进行检视；

2）在可见光、紫外光下均不显示，也没有合适的显色方法的物质，可在紫外光灯254nm下观察荧光薄层板上黄色荧光背景上的紫蓝色斑点，这是由于化合物减弱了吸附剂中荧光物质的紫外吸收强度引起了荧光的熄灭所致。